Определение состава сахаров в почках и побегах винограда методом хроматографии на бумаге

Определение состава сахаров в почках и побегах винограда методом хроматографии на бумаге

Количественное определение сахаров с применением хроматографии на бумаге включает в себя следующие основные операции: а) фиксацию растительного материала; б) экстракцию сахаров и очистку вытяжки от белков и других примесей; в) распределительную хроматографию сахаров на бумаге; г) элюцию сахаров с бумаги; д) определение их содержания в элюатах.

Реактивы и материалы: а) хроматографическая бумага Ленинградская «быстрая» № 1; «Filtrak» FN-4; ватман № 1 и 2; б) этанол, 96%-ный и 80%-ный; в) уксуснокислый свинец (средний)

раствор; г) сернокислый натрий, насыщенный раствор; д) смесь-н-бутанола, пиридина и воды в соотношении 6:4:3 (по объему), или е) смесь н-бутанола, уксусной кислоты и воды в соотношении 4:1:5 (по объему). Если смеси растворителей разделяются на два слоя, то берут верхний; ж) проявители на кетозы: I — резорцинфосфат. 0,2 г резорцина растворяют в 100 мл 96%-ного этанола. Перед проявлением хроматограммы смешивают 10 объемов спиртового раствора резорцина С ОДНИМ объемом ортофосфорной КИСЛОТЫ мочевина. 5 г мочевины растворяют в спирта и добавляют 20 мл

2 н раствора соляной кислоты; з) проявители на альдозы: I — анилинфталат (см. с. 212); II-анилиноксалат: 0,93 г перегнанного анилина растворяют в 50 мл 96%-ного этанола, после чего смешивают с равным объемом 0,2 М раствора щавелевой кислоты в этаноле (можно также брать водный 0,2 М раствор щавелевой кислоты); и) глюкоза, фруктоза, сахароза и другие сахара, -ные растворы; к) реактивы для количественного определения сахаров по антроновому методу (см. с. 225).

Навеску свежего растительного материала (10—30 г) заливают (для фиксации) десятикратным объемом кипящего 96%-ного этанола, нагревают 2—3 мин., добавляя небольшое количество углекислого кальция или натрия в порошке для нейтрализации кислот (под контролем лакмуса или универсального индикатора). Зафиксированная навеска (в колбе или склянке с притертой пробкой) может храниться в течение нескольких месяцев (в темном и прохладном месте). Фиксация спиртом является и началом экстракции сахаров, которые частично переходят в раствор.

Сахара экстрагируют горячим (70—80°) 80%-ным этанолом 3 раза по 30 мин. Перед началом экстракции рекомендуется дополнительно растереть материал в ступке. Спирт, который служил для фиксации навески, объединяют со спиртовыми вытяжками.

После каждой экстракции охлажденную спиртовую вытяжку центрифугируют. Объединенные спиртовые вытяжки сгущают в вакууме до небольшого объема (2—3 мл). Если материал богат хлорофиллом и каротиноидами, то сгущенную вытяжку несколько раз взбалтывают с петролейным эфиром. Эфирный раствор пигментов

сливают, а остатки растворителя удаляют на водяной бане при 50—60°.

Сгущенную вытяжку количественно переводят в мерную колбу на 5 или 10 мл. Для осаждения белков и других примесей прибавляют по каплям раствор уксуснокислого свинца. Проверив полноту осаждения, раствор в колбе доводят до метки, затем фильтруют или, еще лучше, центрифугируют. Для осаждения избытки свинца, не вошедшего в реакцию, добавляют одну каплю насыщенного раствора сернокислого натрия и снова центрифугируют или фильтруют.

Рис. 16. Схема разделения сахаров на хроматограмме и определение положения пятен на основной, непроявленной части (по О. А. Павлиновой): а и б — опрыскивание резорцинфосфатом. а — опрыскивание анилинфталатом; в непроявленная основная часть хроматограммы. С — сахароза; Г — глюкоза; Ф — фруктоза; 3 —олигосахариды.

Нарезают полосы хроматографической бумаги длиной 50—55 см и шириной 13—19 см или другого размера (в зависимости от диаметра хроматографической камеры). Бумагу разлиновывают графитовым карандашом, оставляя с одной стороны листа одну, а с другой — две контрольные полосы шириной 2— 2,5 см (рис. 16).

Низ хроматограммы вырезают зубцами, что способствует равномерному скапыванию растворителя и предотвращает наблюдающийся иногда перекос пятен. Затем на линию старта отдельными пятнами по одному на основной части хроматограммы и на каждой из контрольных полос наносят с помощью микропипетки или капилляра определенный точный объем испытуемого раствора (например, по 0,01; 0,02 или 0,03 мл в пятно). Количество экстракта, наносимого в пятно, должно соответствовать примерно 30—50 мг сырого веса исследуемого материала в том случае, если в нем содержится 5—7 мг глюкозы, фруктозы и сахарозы на 1 г сырого веса ткани. Для установления оптимальной концентрации сахаров, вносимых в пятно, ставят отдельно две

контрольные хроматограммы с нанесением различных объемов опытного экстракта (0,01-0,04 мл в пятно). На те же полосы наносят также и метчики — растворы сахаров растворов).

После нанесения растворов на бумагу приступают к разделению сахаров в соответствующей смеси растворителей (н-бутанол — пиридин — вода, 6:4:3; н-бутанол — уксусная кислота — вода, 4:1:5). Хроматография нисходящая. Продолжительность разделения 2—3 суток.

После разделения хроматограммы высушивают в токе воздуха (в вытяжном шкафу) до полного удаления следов растворителя. Следующей задачей является определение положения пятен на основной части хроматограммы, так как сахара элюируют из непроявленной части бумаги. Для этого от основной хроматограммы отрезают контрольные полосы а, а и б и опрыскивают две из них, например а и б, проявителями на кетозы (резорцинфосфатом или раствором мочевины), а полосу а — проявителем на альдозы (анилинфталатом или анилиноксалатом).

Полосу, опрыснутую резорцинфосфатом, прогревают 3—4 мин. в сушильном шкафу при температуре 85—95°. Пятна фруктозы, сахарозы, раффинозы и олигосахаридов, содержащих фруктозу, окрашиваются в интенсивно розовый цвет.

При нагревании хроматограммы, опрыснутой раствором мочевины, в течение 5 мин. при 105° пятна кетоз принимают синее окрашивание.

Полосу, обработанную раствором анилинфталата или анилиноксалата, нагревают при 105—110°. При обработке хроматограммы анилинфталатом глюкоза и галактоза проявляются в течение 5 мин. при 105° в виде желтовато-коричневых пятен; пятна пентоз вишнево-красного цвета. Мальтоза и лактоза дают желто-коричневые пятна при нагревании в течение 20 мин. при 105°. При проявлении анилиноксалатом (110°, 5—6 мин.) пятна альдоз имеют коричневое окрашивание.

Проявленные контрольные полосы с, а и б прикладывают к основной части хроматограммы (в и таким образом определяют положение пятен отдельных сахаров на полосе в, не проявляя ее. Участки бумаги, содержащие непроявленные пятна глюкозы, фруктозы, сахарозы

и олигосахаридов, вырезают, разрезают на маленькие кусочки («лапшу») и элюируют сахара водой три раза по 30 мин. при 60—70°. Элюаты фильтруют через маленькие бумажные фильтры, выпаривают на водяной бане до небольшого объема, снова фильтруют и доводят до определенного объема.

В растворе определяют содержание сахара с помощью антронового реактива.

Экспресс-анализ сахаров методом высокоэффективной жидкостной хроматографии Текст научной статьи по специальности «Ветеринарные науки»

Аннотация научной статьи по ветеринарным наукам, автор научной работы — М. И. Соколов, Н. Д. Верзилина, О. Б. Рудаков, В. И. Толоконников, А. П. Никульшин

На модельных и реальных пробах авторами разработана и испытана упрощенная экспресс-методика контроля моно-, дисахаридов и их производных в экстрактах из растительного сырья.

Похожие темы научных работ по ветеринарным наукам , автор научной работы — М. И. Соколов, Н. Д. Верзилина, О. Б. Рудаков, В. И. Толоконников, А. П. Никульшин

Express-analysis of high-effective liquid chromatography

On model and real samples by authors elaborated and tested is simplified express-method of control of mono and polysaccharides and their derivatives in extracts from vegetable raw materials.

Текст научной работы на тему «Экспресс-анализ сахаров методом высокоэффективной жидкостной хроматографии»

КАЧЕСТВО И БЕЗОПАСНОСТЬ

методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

М.И.Соколов, Н.Д.Верзилина, О.Б.Рудаков, В.И.Толоконников, А.П.Никульшин, К.К.Полянский

Воронежский государственный аграрный университет им. К.Д. Глинки Воронежская государственная технологическая академия

При проведении опытов по селекции в растениеводстве и при переработке сельхозсырья возникает необходимость определения в растениях содержания различных сахаров. Один из наиболее эффективных методов решения этой задачи – обращенно-фазовая высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) [1].

Нами испытаны возможности экспрессного определения углеводов в рас-

Рис. 1. Хроматограмма 2-й фракции экстракта стевиозида: А – суперпозиция трех пиков, разделенная с применением компьютерных технологий (1 – глюкоза, 2 – сахароза); 3 – фракция стевиозидов

тительных экстрактах с помощью ВЭЖХ с рефрактометрическим детектированием (хроматограф 1_Р-250, Чехия) на колонке 300×4,8 мм, заполненной сорбентом Нуклеосил ЫИ2, зернением 10 мкм. В качестве элюента использовали деионизированную воду.

Как правило, ВЭЖХ углеводов на аминопропильной фазе проводят с использованием смесей ацетонитрил -вода. Применение чистой воды имеет свои преимущества и недостатки. Преимущества в том, что существенно сокращается время анализа, подвижная фаза становится нетоксичной, существенно уменьшается стоимость анализа. За эти явные преимущества приходится расплачиваться некоторым ухудшением селективности разделения. Время удерживания моносахаридов становится практически одинаковым. Вместе с тем сохраняется возможность разделения моно- и дисаха-ридов и олигосахаридов (рис. 1 и 2). Ниже представлены размеры их молекул, рассчитанные по программе С1″1ет01″Нсе 2002 [2].

Размеры молекул сахаров

Рис. 2. Хроматограмма водного экстракта из сахарной свеклы: 1 – глюкоза; 2 – сахароза

Вещество D , нм max’

L (+) рабиноза 0,54

L ( + ) рамноза 0,65

В выбранных условиях ВЭЖХ последовательность удерживания углеводов определяется молекулярной массой и степенью гидроксилирования молекулы. Чем больше число гидроксильных групп, тем с большим числом аминогрупп на модифицированной поверхности сорбента взаимодействует анализируемый углевод.

Одна из важных проблем анализа экстрактов углеводов – пробоподго-

товка образцов для ввода в жидкостный хроматограф. Наряду с низшими углеводами в экстракты попадают растворимые полисахариды, которые следует предварительно отделять, так как они прочно сорбируются на колонке и быстро приводят ее в негодность. Так, введение пяти плохо отфильтрованных проб в хроматограф вызывает рост давления на входе колонки с 3,5 до 7,5 МПа. В нашей практике после прямого введения примерно ста проб растворов сахаров давление на входе в колонку выросло в пять раз и колонка перестала делить компоненты пробы.

Из приведенных примеров видно, как важно исследуемый объект освободить от твердых частиц, малорастворимых и растворимых высокомолекулярных примесей. Оптимально достичь этой цели можно путем твердофазной экстракции. Как следует из данных [3], фильтры Шотта не применимы для этих целей. С их помощью можно отфильтровать только грубые взвеси. Бумажные фильтры имеют также достаточно большой размер пор [4].

Наиболее подходящий метод подготовки пробы – твердофазная экстракция. Для проведения твердофазной экстракции используют шприцы (патроны), дно которых заполнено слоем сорбента. Для удаления полисахаридов пригоден сорбент с такой же привитой фазой (тот или иной силикагель с привитой фазой NH2). Сорбент в патроне для твердофазной экстракции смачивают смесью ацетонитрил – вода (80:20), затем водой. После чего вводят образец. На 6 мл сорбента – 1 мл пробы. Затем патрон промывают водой. Важно, чтобы олигосахариды не проскакивали, а оставались на сорбенте в патроне. При смывании исходят из расчета 1 мл воды на 2-4 мл сорбента. Для ускорения твердофазной экстракции используют вакуум, так как сорбент в патроне имеет мелкое зернение. Патрон вставляют в колбу Бунзена и подключают к вакуумному насосу. Можно применять специальные приспособления, так называемые «мэнифалды» (от англ. vacuum manifolds), в которые одновременно можно вставлять большое количество патронов для извлечения проб. Скорость элюирования – 1-2 мл/мин. Полезно на 1 мин задерживать элюент в патроне перед элюированием.

В настоящее время методы твердофазной экстракции для концентрирования и адсорбционной очистки пробы с целью ее дальнейшего хромато-графического анализа получили широкое распространение в подготовке проб из биообъектов [5]. На рис. 1 и 2 представлены хроматограммы экст-

QUALITY AND SAFETY

ракта углеводов из стевии и для сопоставления – из сахарной свеклы.

Экстракцию сахаров из стевии осуществляли следующим образом: в центрифужные пробирки помещали измельченную растительную массу в количестве 1 г; экстракцию проводили 70%-ным этанолом; первую экстракцию проводили 4 ч с периодическим перемешиванием стеклянной палочкой содержимого центрифужной пробирки, затем центрифугировали 10 мин при 5000 об/мин; вторую – четвертую экстракцию также осуществляли 70%-ным этанолом при периодическом перемешивании осадка в растворителе с последующим центрифугированием при тех же условиях.

Объединенную насадочную жидкость очищали на колонке, заполненной ионообменными смолами.

Пробу сахаров из свеклы готовили по методике [6]. Хроматограммы регистрировали при расходе подвижной фазы 0,3 мл/мин, объем пробы 20 мкл (рис. 2).

Актуальность разработки таких методик определяется тем, что дорогие природные подсластители (стевиози-ды) фальсифицируются дешевыми синтетическими подсластителями – ас-

партамом или сахарином, необходим контроль за степенью извлечения сте-виозидов из исходного сырья. Применение чистой воды в целом повышает технико-эксплуатационные характеристики метода хроматографического контроля. В настоящее время производят колонки, в которых за счет тщательной прививки модифицирующих групп колонки с аминофазой поверхность сорбента лучше смачивается водой, что позволяет использовать при хроматог-рафировании только воду без потери селективности разделения [4].

Таким образом, нами разработана и испытана на модельных и реальных пробах упрощенная экспресс-методика контроля моно-, дисахаридов и их производных в экстрактах из растительного сырья.

1. Рудаков О.Б, Родионова И.С., Бочарова О.И. Современное состояние количественного контроля углеводов в пищевых продуктах методами высокоэффективной жидкостной хроматографии // Хранение и переработка сельхозпродукции. 1999. № 2. С. 52-56.

2. Рудаков О.Б., Соколов М.И., Болдырев С.Ю., Шестаков А.С. Гель-проникающая хроматография смесей оли-го-, ди- и моносахаридов//Известия вузов. Пищевая технология. 1999. № 5-6. С. 92-94.

3. Воскресенский В.И. Техника лабораторных работ. – М.: Химия, 1969.

4. Мусакин А.П., Рагинский Ф.Ю., Суглобова К.Д. Оборудование химических лабораторий. – Л.: Химия, 1978.

5. Сычев К.С., Даванков В.А. Материалы и методы пробоподготов-ки в хроматографии: твердофазное концентрирование и адсорбционная очистка / Сорбционные и хрома-тографические процессы. – Воронеж: ВорГУ, 2004, т. 4, вып. 1, с. 5-28.

6. Ермаков А.И., Арасимович В.В., Яроси Н.П., Перуанский Ю.В., Луков-никова Г.А., Иконникова М.И. Методы биохимического исследования растений. – Л.: Агроиздат, 1987.

7. Рудаков О.Б., Востров И.А., Федоров С.Ф., Филиппов А.А., Селеменев В.Ф., Приданцев А.А. Спутник хроматографиста. Методы жидкостной хроматографии. – Воронеж: Водолей, 2004.

Комплектация исследовательских лабораторий и лабораторий контроля качества

Тест-наборы и реактивы для анализа воды Расходные материалы для хроматографии и других физико-химических методов анализа Аналитические приборы Лабораторная посуда и вспомогательные приборы (рН-метры, весы, термостаты, печи, мешалки и др.) Реактивы для биохимических и микробиологических исследований, питательные среды Пищевые добавки и эфирные масла

Справочник химика 21

Химия и химическая технология

Бумажная хроматография сахаров

Центральной задачей при получении олигосахаридов почти из любого источника является выделение индивидуальных соединений из смеси моно- и олигосахаридов. Для этой цели разработано несколько методов, основанных на хроматографии . Наиболее старым из них является распределительная хроматография на целлюлозе . Для элюирования обычно используют системы растворителей, аналогичные тем, которые применяются для бумажной хроматографии сахаров (см, гл, 14), Этот метод позволяет осуществлять вполне удовлетворительное разделение, однако характеризуется малой емкостью колонок и требует довольно много времени. Более эффективна адсорбционная хроматография на смеси угля и целита (см., например, ” ). С таких колонок моносахариды обычно элюируются водой, а олигосахариды элюируются в порядке возрастания степени полимеризации водно-спиртовыми смесями с увеличивающейся концентрацией спирта. В последние годы такой метод стал основным способом разделения смесей олигосахаридов. Смеси высших олигосахаридов хорошо разделяются гель-фильтрацией на сефадексе Г-25 . Однако для низших олигосахаридов (степень полимеризации 2—4) этот способ мало эффективен . [c.425]

Возникновение и бурное развитие метода хроматографии сахаров на бумаге повлекло за собой появление способов обнаружения веш,еств в мягких условиях, пригодных для обработки бумажных хроматограмм . Особенно часто для этой цели используют реакции восстановления серебряных oлeй окисления разнообразных производных моносахаридов периодат-купратом калия и многочисленные цветные реакции моносахаридов с ароматическими аминами — анилином, п- и о-аннзидином и многими другими в присутствии фталевой, ш,авелевой, трихлоруксусной, фосфорной и других кислот ( м. ). Напротив, тонкослойная хроматография на силикагеле и окиси алюминия позволяет применять для обнаружения предельно жесткие реагенты, из которых наибольшей популярностью пользуется концентрированная серная кислота ( м. ). [c.410]

Методика количественной бумажной хроматографии сахаров, органическ кислот и аминокислот у растений. Изд. АН СССР, 1962. [c.288]

Методика количественной бумажной хроматографии сахаров, органических кислот и аминокислот у растений. М.-Л., Изд-во АН СССР, 1962. 87 с. [c.400]

Применение бумажной хроматографии. Методом БХ разделяют органические кислородсодержащие соединения спирты, сахара, альдегиды и кетоны, органические кислоты, фенолы, флавоноиды, кумарины, стероиды и терпеноиды, хиноны, антрахи-ноны, полициклические соединения, пигменты из растений и т. п. [c.356]

Щелочной лигнин однократно очищали из ацетон-воды и отделяли от свободных сахаров бумажной хроматографией. Затем лигнин экстрагировали из бумаги ацетоном, гидролизовали серной кислотой и вновь хроматографировали. При 2-часовой экстракции были получены слабые пятна ксилозы при 4- и 8-часо-.вой экстракции пятен не было. [c.738]

После ацетилирования образцов целлюлозы при помощи хлороформа и ацетона были экстрагированы ацетилированные лигнины. Последние содержали как лигнин, так и пентозаны. Они были деацетилированы 0,1 н. едким натром и при помощи бумажной хроматографии разделены на лигнин и свободные сахара. Далее лигнины, свободные от углеводов, были экстрагированы из хроматограммы ацетоном и гидролизованы концентрированной серной кислотой. [c.741]

Большую роль в изучении продуктов ФГ гемицеллюлоз сыграл метод бумажной хроматографии, позволяющий разделить смесь продуктов, выделенных из реакционной среды, и идентифицировать сахара — как моно-, так и олигосахариды [42, 44, 54, 59, 74, 77, 78]. [c.226]

Известные в настоящее время многочисленные реактивы для обнаруже-лия сахаров в бумажной хроматографии можно также с успехом применять и в методе ХТС (реактивы № 7, 8, 9, 10, 18, 67, 110, 116, 120, 135, 137 и 145). [c.459]

При помощи метода бумажной хроматографии можно не только определить качественный состав раствора сахаров, но и дать приближенную их количественную оценку. Для этого на лист фильтровальной бумаги наносят, в порядке уменьшения концентрации, ряд растворов отдельных сахаров от 20 до 10% (20 17,5 15 12,5 10%) и затем хроматографируют. [c.157]

Метод бумажной хроматографии щироко используется в органических и биохимических исследованиях. Он позволяет проводить разделения таких соединений, как амины, алкалоиды, сахара, углеводы, глицериды, аминокислоты, протеины, витамины, гормоны, антибиотики и др. Следует отметить, что при хроматографировании вещества не изменяются химически, что чрезвычайно важно в биологических исследованиях. [c.48]

Весьма перспективна комбинация бумажной хроматографии с радиоактивными индикаторами. Содержание последних в отдельных пятнах определяется либо при помощи фотопластинки, либо счетчиком Гейгера. Применяя радиоактивную углекислоту, удалось таким путем выяснить, какие вещества (сахара и аминокислоты) образуются в растении при ассимиляции углекислоты [c.220]

Важнейшей областью применения электрофореза является анализ биоколлоидов, например анализ смесей белков в клиническом анализе. Белки, как амфотерные полиэлектролиты, обладают собственными зарядами, зависящим от pH среды. Регулируя значение pH, можно в широких пределах менять их подвижность и даже изменить направление движения в процессе электрофореза. Для каждого белка при определенном значении pH общее число положительных зарядов равно общему числу отрицательных зарядов. Эта изоэлектрическая точка, при которой отсутствует движение частиц, является характерной величиной для определенного белка. Растворимость белка в этой точке минимальна. Подбирая соответствующие буферные растворы для установления определенной скорости движения и растворимости веществ, можно приспособить процессы электрофореза для решения разных проблем разделения веществ. Таким образом, электрофорез превосходит метод бумажной хроматографии. Кроме того, при помощи электрофореза, особенно при высоком напряжении, можно проводить разделение неионогенных веществ (например, сахар в виде боратного комплекса) [79]. Методом электрофореза можно также определять изоэлектрические точки амфотерных веществ или заряды коллоидных частиц (по направлению движения). [c.387]

Много работ опубликовано по хроматографии углеводов, особенно В. В. Рачинским, Б. Н. Степаненко. Установив зависимость между структурой и величиной Rf, можно оценить степень полимеризации олигосахаридов, влияние положения оксигрупп. На бумаге из стеклянных волокон, предварительно забуференной, можно четко разделять различные монозы, биозы, триозы, галактуровую и глюкуроновую кислоты. В микроорганизмах можно определять связанные углеводы, свободные MOHO- и дисахариды в растительном материале, также свободные олигосахариды, свободные углеводы в крови и моче, молоке, наблюдать гидролиз и синтез олиго- и полисахаридов, энзиматические превращения моносахаридов в связи с процессами окисления, восстановления, изомеризации, реакции углеводов с азотсодержащими соединениями, контролировать чистоту углеводов и идентифицировать их, определять кислоты и ла-ктоны, уроновые кислоты, кетокислоты, метилированные сахара, дезоксисахара, аминосахара, полисахариды, инозит, сорбит, эфиры фосфорной кислоты, структуру галактоманнана, эремурана, новых галактозидов, проследить превращение сахарозы, синтез олигосахаридов в растущей культуре. Бумажная хроматография применяется в сахарной промышленности, в пивоварении. Мало еще разработана теория распределительной хроматографии углеводов, мало изучены возможности разделения оптических изомеров и антиподов. [c.201]

Диоксанлигнин бука при помощи бумажной хроматографии был отделен от сахаров, затем исчерпывающе метилирован и подвергнут гидролизу 5%-ной соляной кислотой. При последующей бумажной хроматографии была доказана не диметилксилоза, а триметилксилоза. [c.742]

Трейнар обнаружил, что поведение этого комплекса при гидролизе идентично поведению комплекса, экстрагированного им водой при 140°, Осаждение лигнина совмещалось с выделением редуцирующи.х сахаров. Затем комплекс был исчерпывающе фракционирован. После этого бумажной хроматографией было установлено отсутствие в комплексе свободных сахаров. При его [c.747]

Хроматография на бумаге. Впервые в современной форме метод бумажной хроматографии был описан Консденом, Гордоном и Мартином [16]. Хроматографирование на бумаге может быть применено для разделения микрограммовых количеств многих веществ, таких, как алкалоиды, нуклеозиды, нуклеотиды, сахара, аминокислоты, флавоноиды, таннины, стероиды, птеридины и фосфолипиды. Метод имеет много общего с распределительной хроматографией в качестве носителя используется фильтровальная бумага. Однако в этом случае не происходит распределения в истинном смысле этого слова (между несмешивающимися растворителями), так как разделение достигается с помощью растворителей, смешивающихся с водой. Согласно Ледереру [2], вопрос о том, обусловлен ли процесс хроматографирования на бумаге адсорбцией на водно-целлюлозном комплексе или же распределением внутри этого комплекса, рассматриваемого в качестве стационарной фазы, относится скорее к области терминологии, чем к существу дела . [c.21]

Разработаны микрометоды для полной идентификации антоцианов, включая определение вида сахара и места его присоединения. Эти методы основаны на бумажной хроматографии гликозидов (в нескольких обычных растворителях), агликонов, сахаров и коричных кислот, получающихся при гидролизе (Харборн [175]), с последующим изучением спектров гликозидов и агликонов [176]. Антоцианы поглощают в видимой области при 500—550 ммк в 0,01%-ном растворе соляной кислоты в метаноле в ультрафиолетовой области полоса менее интенсивна. Положение максимума в видимой области изменяется в зависимости от значения pH и типа растворителя, поэтому существенным является использование указанных выше стандартных растворителей. Антоцианы с 3, 4 -диоксигруппой обнаруживают батохромный сдвиг в присутствии хлористого алюминия. Соотношение сахар — агликон в антоцианах определяют спектрофотометрически 1) путем установления вида сахаров после разделения кислотных гидролизатов на бумаге и опрыскивания фосфатом анилина 2) путем спектрофотометрического определения концентрации антоцианидина в гидролизате. Место присоединения и природа сахарных групп (если присутствуют ди- и трисахариды) определяют изучением сахаров, образующихся после расщепления молекулы путем окисления перекисью водорода и перманганатом калия (Чандлер и Харпер [177]), а также при частичном кислотном или ферментативном гидролизе. [c.65]

В отдельной навеске, после гидролиза 3%-ной НС1 и до экстракции Щелочью, было определено содержание целлюлозы гидролизом 72%-ной H2SO4. Полученный результат (содер- жание целлюлозы 1,1%) следует, однако, считать недостоверн ным, так как при наличии РВ в гидролизате присутствие сахаров не подтвердилось данными бумажной хроматографии. [c.67]

Идентификация двух-и трехатомных фенолов (пирокатехина, пирогаллола, резорцина, флуорглюцина, орсина и гидрохинона) [102]. Идентифицировать эти вещества можно методом бумажной хроматографии. Хроматограмму обрызгивают сахаром (2,0 г) в растворе соляной кислоты (10 мл) и спирта (90 мл), нагревают 40—60 секунд и наблюдают возникающую характерную для различных фенолов окраску и флуоресценцию в ультрафиолетовом свете. [c.214]

Известны особые свойства сахаров, фосфорилированных по гликозид-ному гидроксилу. Нами был впервые изучен синтез соответствующих трехвалентных фосфорных производных. Так, И. П. Гудковой и И. К. Голов-никовой было установлено, что 2,3,4,6-тетраацетат глюкозы может быть превращен в 1—Г,3 -бутиленфосфит-2,3,4,6-тетраацетат глюкозы. Продукт реакции окислен и гидролизован, причем получен глюкозо-1-фосфат, идентифицированный с известным образцом методом бумажной хроматографии. В настоящее время выясняются границы синтеза гликозид-фосфитов и подобных соединений. Кроме фосфорилирования производных гексоз в нашей лаборатории начато исследование по синтезу нуклеозид-фосфитов и подобных им соединений [17], которые привлекли внимание и других исследователей [18, 19]. [c.328]

Недавно появился обзор по химии самой эллаговой кислоты, а также родственных простых эфиров и карбоновых кислот (Джерд [50]). Эти соединения встречаются в природе в свободном состоянии или в соединении с сахарами. С помощью бумажной хроматографии эллаговая кислота легко отделяется от галловой кислоты, ее спектр в ультрафиолетовой области имеет две полосы при 366 ммк и более интенсивную — при 255 ммк. В присутствии ацетата натрия первая полоса испытывает гипсохромный сдвиг (И ммк), а интенсивность второй полосы удваивается. [c.54]

К числу наиболее удобных и широко применяемых методов специфического введения трития относится восстановление альдегидов, кетонов или лактонов боргидридом-ОД натрия. С появлением новых методов селективного окисления сахаров указанные оксопроизводные стали легкодоступными соединениями [1]. Продукты восстановления выделяют методом препаративной ТСХ (см. гл. 8), бумажной хроматографии или ферментативными методами [2], после чего полученные соединения разбавляют неактивными аналогами, чтобы активность препаратов соответствовала требуемой. Иногда наблюдается преимущественное образование одного из возможных изомеров. Так, восстановление 1,2 5,6-ди-О-изопропилиден-а-о-рмбо-гексофуран-З-улозы боргидридом- Н натрия приводит к о-алло-соед.шению, выход которого превышает 98% [3] (см. [c.375]

Сахарозу определяют после легкого гидролиза разбавленной (до 2%) соляной кислотой при температуре 68—70°С в течение 3 мин [11]. Фруктозу, глюкозу, мальтозу, лактозу — различными химическими методами [8, 16]. Лактозу, мальтозу и рафинозу также часто определяют энзиматическими методами с добавлением суспензии дрожжей или препаратов ферментов [8, 16, 22]. Методом бумажной хроматографии [7, 11, 19] отдельные сахара можно определять только полуколичествен-но. Поэтому при подготовке данных для настоящего справочника работы с использованием метода бумажной хроматографии не принимались во внимание. [c.219]

Идентификация компонентов основана на том, что их положение на хроматограмме при данных условиях постоянно и может быть установлено предварительными опытами. Таким путем удалось идентифицировать не только все содержащиеся в природных смесях, белковых гидролизатах и т. д. известные аминокислоты, но и обнаружить ряд новых. Бумажная хроматография применена с успехом также к анализу сахаров, пуринов и пири-мвдинов, антибиотиков и т. д. Методика применима и для количественного микроанализа Для этого отдельные пятна экстрагируются, и экстракт анализ нруетч я колориметрическим или [c.219]

Одна из областей применения бумажной хроматографии — исследование химических превращений пенициллинов. Так, например, были изучены реакции 6-АПК с сахарами и другими веществами [1400, 1401]. Хроматографией контролировали гидрирование /г-нитробензилпенициллина с целью получения п-аминобензилпенициллина [1395]. Появление зоны бензилпенициллина при хроматографировании а-карбоксибензилиени-циллина доказывало распад последнего [1402]. Довольно часто бумажная хроматография использовалась при получении пол/-синтетических препаратов пенициллинов и цефалоспоринов [1403—1410]. [c.223]

Смотреть страницы где упоминается термин Бумажная хроматография сахаров: [c.322] [c.749] [c.200] [c.58] [c.293] [c.436] [c.285] [c.261] Смотреть главы в:

Источники:

http://scask.ru/r_book_prk.php?id=58
http://cyberleninka.ru/article/n/ekspress-analiz-saharov-metodom-vysokoeffektivnoy-zhidkostnoy-hromatografii
http://www.chem21.info/info/1551833/