Микроклональное размножение винограда — виноград

Микроклональное размножение винограда

Биология культивируемых клеток и биотехнология растений: Сборник статей под ред. Р.Г. Бутенко М.: Наука, 1991. 216-220с.
УДК 581.143.6

МИКРОКЛОНАЛЬНОЕ РАЗМНОЖЕНИЕ ВИНОГРАДА
А. Б. БУРГУТИН

Институт физиологии растений им. К. А. Тимирязева АН СССР,
Москва

К микроклональному размножению можно отнести массовое бесполое размножение растений в условиях асептики, позволяющее исключить появление генетически измененных форм [7]. Успешному размножению растений in vitro на практике предшествовала работа по технике культивирования изолированного апекса побега. Морель одним из первых начал успешно культивировать апикальные меристемы многих видов растений (картофель, георгины, орхидеи, подсолнечник, гвоздика) [11, 22]. Р. Г. Бутенко изучала физиологию изолированных верхушечных почек стеблей периллы, фарбитиса, рудбекии, картофеля, сои [4]. Оздоровление винограда с помощью культуры апикальной меристемы с привлечением термотерапии начато Галзи [19, 20], и оно не потеряло актуальности до сих пор [18]. В СССР работы по размножению винограда in vitro ведутся с начала 1980-х годов [1, 3, 5].
Для винограда показаны три пути получения микропобегов.

  1. Микрочеренкование одиночного побега (с одновременным укоренением), полученного от введенной в культуру изолированной почки (меристемы).
  2. Длительная культура пролиферирующих побегов, или активация пазушных меристем (этап размножения) с последующим разделением побегов и их укоренением на иной по составу среде.
  3. Получение эмбриоидов из каллусной ткани и регенерация из них растений.

Для поддерживающей селекции (питомниководство) без опасности повышения изменчивости можно рекомендовать первый из перечисленных путей [21], который мы используем в своей работе [3], тем более что этот путь наиболее разработан технологически. Генетическая стабильность материала, полученного вторым путем, проверяется [21, 24], поскольку длительная культура пролиферирующих побегов с индукцией развития пазушных почек первого, второго и последующих порядков с помощью цитокинина не исключает появления адвентивных побегов (т. е. образования побегов de novo). Так, оптимизм ранних работ по микроразмножению земляники с использованием цитокинина [13] сменился (у того же автора) реальными оценками — при увеличении числа асептических субкультур в поле регистрируют мутанты и значительное снижение урожая ягод [14]. Известно и прямое указание для винограда о повышенной изменчивости при таком способе размножения [16]. Выявление возможных генетических нарушений может быть отодвинуто во времени к генеративному периоду, что недопустимо для плодовых и винограда, так как обнаружение отклонения от сортовых признаков в многолетних насаждениях будет обесценивать производственные посадки.

Эмбриогенез как адвентивный процесс ведет у винограда к появлению форм с отклонениями от исходной [6, 9]. Исходя из изложенного выше, эмбриогенез может быть рекомендован как раз для получения разнообразия, но не для целей питомниководства такой важной сельскохозяйственной культуры, как виноград, для которой генетическая нестабильность, вызванная, в частности, анеуплоидией, может стать причиной пониженной фертильности, не говоря уже об изменении других технологических признаков сорта.

Таким образом, микрочеренкование, по-видимому, найдет в практике питомниководства винограда наибольшее применение, хотя предложены и другие пути, основанные на культуре пролиферирующих побегов при высоких концентрациях цитокининов [6], хотя с последним мы согласиться не можем.
Следует подчеркнуть, что полностью отказаться от применения цитокинина пока не представляется возможным и для первого из предложенных путей, хотя это применение и ограничивается всего одним (нулевым) пассажем — культивирование изолированной меристемы. При введении же образца в культуру in vitro крупным эксплантом (часть побега, почка), когда не стоит задача оздоровления, необходимость применения цитокинина отпадает полностью [10, 15], если предполагается вести размножение микрочеренкованием.

При размножении микрочеренкованием приходится считаться с особенностями винограда как древовидной лианы — не все черенки дают побег одновременно, как это имеет место для травянистых (например, картофель). Если черенок взят не из ювенильной, не из верхушечной части побега, то его развитие (укоренение, побегообразование) отстает. Часть черенков не дает побегов совсем. Последнее зависит от генотипа. Так, формы Подарок Магарача и Кобера 5ББ дают до 100% побегов при микрочеренковании, а для сортов Ркацители, Ананасный характерны цифры 70 и 60% соответственно.

При масштабировании процесса имеет значение депонирование при низких положительных температурах [21]. Мы испытали метод холодного хранения для ряда генотипов (Подарок Магарача, Кишмиш белый и др.). Все испытанные сорта были возобновлены после 8 мес хранения при температуре 12—15° в камере фитотрона ИФР АН СССР.

В любом случае эффективность размножения такова, что позволяет получать в год от одной инициали сотни тысяч пробирочных растений.
Детально остановиться на всех моментах, связанных с культивированием растений in vitro, не позволяют рамки данного сообщения. Общие положения подробно освещены как в зарубежных [17, 25], так и в отечественных руководствах [4, 7]. Многие моменты технологии размножения винограда in vitro представлены в уже упоминавшемся выше пособии [6]. И все же мы считаем необходимым остановиться на некоторых аспектах нашего личного опыта работы с виноградом.

Питательные среды. С равным успехом были испытаны питательные среды на основе прописей неорганических солей, используемых рядом авторов [6, 8, 21, 24]. При сравнении их в эксперименте мы остановились на уже использованной нами прописи [3], основанной на неорганических компонентах по Мурасиге и Скугу [23] с введением ИУК в концентрации 0,1— 0,2 мг/л. При культивировании апикальных меристем ауксин в этой прописи заменяется на цитокинин (БАП в концентрации 1 — 2 мг/л). Считаем, что при введении в культуру in vitro первые субкультивирования предпочтительнее проводить в прозрачных твердых средах (агар-агар) — так эффективнее осуществить контроль контаминации. При получении развитого побега дальнейшие субкультивирования можно проводить и в непрозрачных (активированный уголь, искусственные смолы и другие наполнители: песок, целлюлоза и т. д.) и жидких средах, если в этом будет необходимость.

Перевод растений в почвенную культуру. Мы применили приемы, позволяющие значительно упростить технологию перевода растений в почвенную культуру [2]. По существующей технологии растения in vitro проходят адаптацию к условиям климатической камеры или оранжереи после извлечения их из пробирок (колб). Для винограда такой подход не позволяет отказаться от создания влажной камеры в первый период адаптации, как это удается, например, для картофеля [12]. Нежные ткани листочков пробирочного растения винограда вянут и некротизируют без влажной камеры (вариант — мелкокапельное опрыскивание).
Мы применили другой подход, позволяющий обойти существующие трудности. Адаптацию к условиям климатической камеры или оранжереи растения безболезненно проходят в пробирках — для этого достаточно снять пробки с тех пробирок, в которых побег достиг пробки. В таком состоянии растения оставляют на 1,5 — 2 нед. Чтобы предотвратить образование плесеней на агаризованной среде, достаточно 3 — 4 раза за этот период полить растения водопроводной водой — увлажнить поверхность агара и лишнюю воду слить, перевернув пробирку. В конце указанного периода верхушка растения и один-два развитых листочка будут вне пробирки. Такое растение готово к пересадке в почву. Растение следует пересаживать с агаризованной средой — так меньше повреждается корневая система. Необходимо заглублять побег в почвенный субстрат так, чтобы над поверхностью оставалась верхушка с одним-двумя развитыми листочками. Туманообразующая установка или влажная камера не требуются. Чтобы защитить растение от патогенов следует применять стерильный почвенный субстрат или речной песок, свободный от нематод, а помещение изолировать от насекомых-переносчиков болезней.

Статья по теме:   Сорт винограда Лехзин

Данной технологией неоднократно испытаны следующие формы: Магарач 124-66-14, Ркацители, Кишмиш белый (Хисрави), Тайфи розовый, Кобера 5ББ, Мускат янтарный, Крымская жемчужина. Последние два сорта переданы нам А. И. Шелякиным (Отдел виноградарства республиканской сельскохозяйственной опытной станции Чечено-Ингушской АССР, Грозный). Из более чем 200 пересаженных таким образом растений не было ни одного выпада. Растения сорта Ркацители, высаженные из пробирок в 1988 г., дали урожай ягод в 1989 г. в условиях оранжереи ИФР АН СССР.

ЛИТЕРАТУРА

  1. Абраменко Н. М. Изучение возможности ускоренного размножения винограда в культуре in vitro // Вирусные, микоплазменные и бактериальные болезни плодовых культур и винограда в Молдавии. Кишинев, 1980. С. 100 — 105.
  2. Бургутин А. Б. Микроклональное размножение винограда: Перевод растения в почвенную культуру // Биология культивируемых клеток и биотехнология: Междунар. конф.: Тез. докл. Новосибирск, 1988. Т. 2. С. 312.
  3. Бургутин А. Б., Бутенко Р. Г., Катаева Н. В., Голодрига П. Я. Быстрое клональное размножение виноградного растения // С.-х. биология. 1983. № 7. «С. 48—50.
  4. Бутенко Р. Г. Культура изолированных тканей и физиология морфогенеза растений. М.: Наука, 1964. 272 с.
  5. Голодрига П. Я., Зленко В. А., Бутенко Р. Г., Левенко Б. А. Ускоренное размножение ценных генотипов винограда // Садоводство. 1982. № 3. С. 24 — 27.
  6. Голодрига П. Я., Зленко В. А., Чекмарев Л. А. а др. Методические рекомендации по клональному микроразмножению винограда. Ялта, 1986. 56 с.
  7. Катаева Н. В., Бутенко Р. Г. Клональное микроразмножение растений. М.: Наука, 1983. 96 с.
  8. Литвак А. И., Кузьменко А. П.. Гузун Н. П., Минакова Р. И. Технология клонального микроразмножения винограда // Питомниководство — решающий фактор развития виноградарства: Респ. конф. по питомниководству: Тез. докл. Кишинев, 1985. С. 66 — 67.
  9. Марченко А. О., Голодрига П. Я., Клименко В. П., Пивень Н. М. Соматический эмбриоидогенез в культуре ткани винограда // Физиология и биохимия культ. растений. 1987. Т. 19. С. 408—411.
  10. Михалевская О. Б., Бургутин А. Б. Почки винограда от побегов разного возраста как исходный материал для микроклонального размножения // Культура клеток растений и биотехнология: Тез. докл. IV Всесоюз. конф. Кишинев: Штиинца, 1983. С. 119.
  11. Морель Ж. Борьба с вирусными болезнями с помощью культивированных тканей // С.-х. биология. 1967. Т. 2. С. 622 — 628.
  12. Трофимец Л. Н., Остапенко Д. П., Бойко В. В. и др. Оздоровление и ускоренное размножение семенного картофеля: (Метод. рекомендации). М.: ВАСХНИЛ, 1985. 36 с.
  13. Boxus Ph., Quoirin М., Laine J. M. Large scale propagation of strawberry plants from tissue culture // Applied and fundamental aspects of plant cell, tissue, and organ culture. B. etc.: Springer, 1977. P. 130 — 143.
  14. Boxus Ph. Cornportement du fraisier issu de micropropagation in vitro: Aspects pratiques actuels // Fruit beige. 1985. Vol. 53. P. 106 ― 110.
  15. Burgulin А. В., Butenko B. G., Mekhalevskaya О. В. Grapevine multiplication in vitro // Plant tissue and cell culture-application to crop improvement: Intern. symp.: Abstracts. Olomouc, 1984. P. 19.
  16. Cancellier S., Cossio P. Risultati di osservazioni su un clone di’Corvina Veronese (Vitis vinifera L.) moltiplicato attraverso la coltura in vitro // Riv. vitic. enol. 1988. Vol. 41. P. 110—117.
  17. Dodds Т., Roberts L. Experiments in plant tissue culture. Cambridge: Cambridge Univ. press, 1985. 232 p.
  18. Duran-Vila N., Juarez J., Arregue J. M. Production of viroid-free grapevines by shoot tip culture // Amor. .J. Enol. and Viticult 1988. Vol. 39. P. 218—220.
  19. Galzy R. Confirmation de la nature virale du courtnoue dc la vigne par des essais de thermotherapie sur des cultures in vitro // C. r. Acad. sci. D, 1961. Vol. 253. P. 706—70Б.
  20. Galzy R. La culture in vitro des apex de Vitis rupestris // Ibid. 1972. Vol. 274. P. 210—213.
  21. Galzy B. Les possibilites de conservation in vitro d’une collection dc vignes // Bull. 0. I. V. 1985. Vol. 58, N 650/651. P. 377—390.
  22. Morel G., Martin C. Guerison de dahlias atteints d’une maladie a virus // C. r. Acad. sci. I). 1952. Vol. 235. P. 1324—1325.
  23. Murashige Т., Skoog F. A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue culture // Physiol. plant. 1962. Vol. 15. R. 473 — 497.
  24. Novak F. J., Javova Z. Clonal propagation of grapevine through in vitro axillary bud culture // Sci. hort. 1982. Vol. 18. P. 231—240.
  25. Plant cell culture: A practical approach/Ed. R. A. Dixon. Oxford: IRL press, 1985. 236 p.

Способ микроклонального размножения винограда «ин витро»

Использование: в сельском хозяйстве и может быть использовано в виноградарстве для ускоренного размещения и оздоровления сортов винограда. Сущность способа: вначале осуществляют микрочеренкование пробирочных растений с 8 10-ю междоузлиями на фрагменты длиной 10 — 12 мм с узлом и листом, а затем высаживают их на твердую питательную среду Мурасиге Скуга. В питательную среду добавляют тонкоразмолотые семена винограда в концентрации 0,1 0,5 от объема среды. 5 табл.

Статья по теме:   Сорт винограда Палатина (Прим) - виноград

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к способам размножения растений, и может быть использовано в виноградарстве для ускоренного размножения и оздоровления перспективных сортов винограда, в исследованиях по физиологии винограда, служит охране окружающей среды.

Известна основная модель клонального микроразмножения растений пролиферация пазушных побегов, основанная на снятии апикального доминирования [1] Есть два направления осуществления этого способа: получение побегов нормальных пропорций с последующим их делением на однопочковые микрочеренки, которые используются в качестве вторичных эксплантов для повторения цикла размножения, введение в питательную среду цитокининов, что приводит к формированию побегов с относительно укороченными междоузлиями, а пазушные почки и меристематические бугорки дают начало новым побегам.

Недостатком данного способа является недостаточно высокий коэффициент размножения в процессе культивирования.

Известен способ клонального микроразмножения винограда микрочеренкованием [2] при котором побег, образовавшийся из изолированной почки и имеющей 8-10 междоузлий, асептически разрезают на фрагменты, включающие узел с листом и почкой. Полученные микрочеренки высаживают в биологические пробирки на агаровую среду, так чтобы нижняя часть была погружена в агар, а затем культивируют в камере фитотрона.

Недостатком способа является то, что в качестве индуктора корнеобразования взята феруловая кислота, которая способна ингибировать рост побегов и снижать выход растений из черенков.

Известен способ микроклонального размножения винограда «Ин витро», включающий микрочеренкование пробирочных растений с 8-10 междoузлиями на фрагменты длиной 10-12 мм с узлом и листом и высадку их на твердую питательную среду Мурасиге Скуга [3] В качестве индукторов корнеобразования здесь используют индолилмасляную и индолилуксусную кислоты.

Трудность заключается том, что при клональном микроразмножении растения растут относительно медленно и это ограничивает эффективность метода при размножении побегов микрочеренками. Одной из причин медленного роста являются стрессовые условия, в которых находятся растения «Ин витро». Кроме этого, основной сложностью технологии на первом этапе является ингибирование ростовых процессов экспланта токсическими веществами, выделямыми им в среду. В результате травмы, полученной эксплантом при изолировании, активизируются ферменты, окисляющие фенолы растений, различные фенолозы. Продукты окисления фенолов обычно ингибируют деление и рост клеток экспланта. Чтобы улучшить положение добавляют активированный уголь, который уменьшает число погибающих растений, или антиоксиданты.

Изобретение предназначено для повышения эффективности клонального микроразмножения.

В предложенном способе микроклонального размножения винограда «Ин витро», заключающем микрочеренкование пробирочных растений с 8-10-ю междоузлиями на фрагменты длиной 10-12 мм с узлом и листом и высадку их на твердую питательную среду Мурасиге Скуга, в питательную среду добавляют тонкоразмолотые семена винограда в концентрации 0,1-0,5% от объема среды.

Новым в предложенном способе является то, что оптимизацию клонального микроразмножения осуществляют за счет питательной среды, в составе которой предлагают стимуляторы роста естественного прохождения, а именно семена винограда, в виде тонкоразмолотого порошка.

Известно, что виноградные семена используют при производстве масла, кормовой муки, удобрений, естественного парника. В предложенном способе семена используются как стимуляторы роста ввиду того, что в них находятся вещества с ценными биологическим свойствами: абсцизовая и хлорогеновая кислоты, общий фенолы, рутин, свободные ауксины и цитокинины.

В состав семян винограда входят такие осмотически активные вещества как соли, сахара, органические кислоты. Также входит большое количество фитогормонов (ауксинов и цитокининов), которые обладают трофическим действием, т.е. способны тормозить деструктивные процессы, которые являются характерной чертой старения органов или целых организмов. Использование семян винограда в виде тонкоразмолотого порошка позволяет адсорбировать токсические вещества, выделяемые растениями при их микрочеренковании в питательную среду, и заменить таким образом активированный уголь. Т.е. налицо неоднозначность предлагаемого приема: адсорбирование токсических веществ, выделяемых пробирочными растениями в питательную среду при их микрочеренковании, и обогащение питательной среды цитокининами, ауксинами и другими фитогормонами, входящими в состав семян винограда. Адсорбирование токсических веществ осуществляют с целью уменьшения ингибирования наружного роста и увеличения регенеративной способности выделенных эксплантов.

Способ осуществляют следующим образом.

Отбирают клонально-размноженные из меристематических верхушек пробирочные растения винограда. Растения должны иметь 8-10 глазков, а затем приступают к приготовлению питательной среды Мурасиге Скуга по общепринятой методике.

Применяют следующий порядок приготовления питательной среды. В 1 л бидистиллированной воды растворяют макроэлементы, микроэлементы, витамины и другие составные части среды.

Навеску предварительно промытого и высушенного агара переносят в колбу, заливают половинным количеством (от объема среды) бидистиллированной воды 1 л и нагревают на плите до 80-100 о С. Семена винограда тщательно промывают, просушивают, перемалывают на лабораторной мельнице до малой фракции около 5 мин. Добавляют их в раствор макро- и микроэлементов, сахара, витаминов и других составных частей среды. Молотые семена добавляют в концентрации 0,25% После растворения и некоторого охлаждения агара к нему добавляют приготовленный раствор. Температура агара и добавленного раствора одинаковая и составляет 80 о С.

Среду фильтруют через два слоя марли и доводят до нужного объема бидистиллятом.

Готовую среду разливают по пробиркам, которые закрывают предварительно простерилизованными в автоклаве ватными пробками, штатив с пробирками закрывают целлофаном и обвязывают шпагатом, а затем среду автоклавируют в автоклаве ГК-1000.

Микрочеренкование осуществляют в операционной комнате в ламинарном боксе «Роботрон». Побеги, имеющие 8-10 глазков, при помощи пинцета извлекают из пробирки, помещают на стерильную чашку Петри, разрезают на микрочеренки, имеющие узел с листом и почкой. Длина микрочеренка 10-12 мм, 2 мм над почкой, остальные под почкой. Получение микрочеренки высаживают в пробирки с приготовленной твердой средой, так чтобы нижняя часть до почки была погружена в агар. Культивирование осуществляют в культуральной комнате при освещенности 2,0-3,0 тыс.люксов, фотопериоде 16 ч, температуре 25-272 о С, влажности воздуха 70-75% Наблюдения за ростом растений осуществляют через 15 дней. Добавление размолотых семян винограда в первую очередь влияет на развитие корневой системы увеличивается число корней и уменьшается их длина, что объясняется наличием в составе семян свободных ауксинов. В конечном итоге количество корней возрастает в 1,8 раза, соответственно уменьшается их длина, но корни от этого не ухудшаются, они становятся более мощными и общая их масса возрастает в 4,1 раза (табл.1.).

Статья по теме:   Биологический вынос - Физиология минерального питания

Это оказывает положительное влияние на рост побегов, образование листьев и новых узлов, хотя на первом этапе отличалось угнетение этих процессов, но на втором месяце культивирования скорость роста пробирочных растений увеличивается за счет добавления в питательную среду размолотых семян винограда, что способствует мощному развитию корневой системы. Торможение же роста в течение первого месяца зависит от наличия в составе семян абсцизовой кислоты и фенолов, которые являются ингибиторами широкого спектра действия.

Положительное действие добавки в питательную среду размолотых семян винограда наблюдали при их концентрации 0,1% от объема среды, максимальный положительный эффект был получен при концентрации 0,25% При дальнейшем увеличении концентрации размолотых семян в среде (0,5%) положительное действие сохраняется, но отмечается тенденция к его снижению.

Развитие пробирочных растений в зависимости от количества молотых семян винограда, добавленных в питательную среду (через 63 дня после начала культивирования), представлено в табл.2.

Таким образом, добавление в питательную среду естественных стимуляторов роста из размолотых семян винограда способствует значительному улучшению корневой системы пробирочных растений после их микрочеренкования, что в свою очередь благоприятствует лучшему росту побегов в высоту, развитию большой листовой поверхности, увеличению общей массы побегов. В результате этого увеличивается число узлов (листьев, в пазухе которых находится почка), которые дают начало новым растениям «Ин витро» после их микрочеренкования, т. е. увеличивается потенциальное микрочеренкование и эффективность клонального микроразмножения.

В табл. 3 и 4 соответственно показаны признаки и состав питательной среды.

Предложенная совокупность признаков способствует повышению эффективности клонального микроразмножения на 27,0% и достаточна для достижения поставленной цели.

Добавление в питательную среду размолотых семян винограда оказывает, в первую очередь, положительное влияние на укоренение и развитие корневой системы пробирочных растений: уменьшается длина главного и придаточных корней, но возрастает их число, что способствует увеличению корневой системы.

Динамика развития пробирочных растений без добавления и при добавлении в питательнуюс. реду размолотых семян винограда 0,25 об. среды представлена в табл.5.

СПОСОБ МИКРОКЛОНАЛЬНОГО РАЗМНОЖЕНИЯ ВИНОГРАДА «ИН ВИТРО», включающий микрочеренкование пробирочных растений с 8 10 междоузлиями на фрагменты длиной 10 12 мм с узлом и листом, посадку их на твердую питательную среду Мурасиге и Скуга и культивирование из них растений, отличающийся тем, что в питательную среду добавляют тонкоразмолотые семена винограда в концентрации 0,1 0,5% от объема среды.

Сельское хозяйство

АГРОНОМИЯ

Система интенсивных технологий производства винограда в северной зоне промышленного виноградарства РФ — Микроклональное размножение винограда

Микроклональное размножение винограда, оздоровление от вирусных и микоплазменных болезней.

Закладка базисных маточников

Способ заготовки черенков на существующих насаждениях без применения массовой и клоновой селекции приводит к размножению низко продуктивных растений, зараженных вирусами, бактериальным раком и другими хроническими заболеваниями, передающимися вегетативному потомству через черенки и снижающими выход стандартнысаженцев, долговечность и продуктивность насаждений минимум на 50%.

Для создания долговечных и перспективных высокопродуктивных сортов и клонов необходим переход к закладке промышленных насаждений сертифицированным посадочным материалом.

Система сертификации (сертификационная схема) посадочного материала винограда, действующая в странах Европейскрго Союза, базируется на четких организационных схемах, установленных технологических требованиях и нормативных документах. По международному определению, сертификационная схема представляет собой систему производства посадочного материала, получаемого из отобранных клонов через несколько стадий размножения, в условиях, обеспечивающих соблюдение санитарных стандартов, для посадки, с целью закладки маточников и промышленных виноградников.

Посадочный материал винограда большинства европейских стран подразделяется на три официальных категории: исходный клоновый, базовый и сертифицированный. «Предбазовый» материал (Nuclear stock) – это коллекция безвирусных клонов, растения которой используются для создания «базового» материала – второй ступени размножения сертифицированного посадочного материала».

«Базовый материал (Propagation stock) – это материал, который сохраняется в строго контролируемых условиях и служит для создания «сертифицированного» материала.

«Сертифицированный» материал (Certified stock) – это материал, который может быть использован как для закладки сертифицированных маточников, так и для закладки плодоносящих насаждений. Посадочный материал, полученный в результате размножения сертифицированного материала, сохраняет свой фитосанитарный статус.

Посадочный материал винограда категорий: исходный клоновый, базовый и сертифицированный (согласно правилам Евросоюза) должен отвечать следующим требованиям:

—отсутствие скрытого поражения вирусами короткоузлия, первым и третьим серотипами вируса скручивания листьев винограда, вирусом мраморности, а также вирусами А и В винограда;

—отсутствие визуального поражения болезнями многолетней древесины.

В большинстве стран участниц Международной организации виноградарства и виноделия производство виноградных саженцев основано на сертификации исходного черенкового подвойного и привойного материала и самих саженцев.

Сертификационные схемы посадочного материала разных стран имеют ряд особенностей. Санитарная селекция (сертификация) регламентирует освобождение в первую очередь от наиболее вредоносных вирусов—короткоузлия и скручивания листьев По фитосанитарному состоянию такой посадочный материал относится к категории— тестированный на вирусы (Virus tested)—материал свободный от особо опасных вирусов и вирусоподобных патогенов.

Вторую категорию представляет посадочный материал свободный от вирусов (Virus free)— материал свободный от всех известных вирусов и вирусоподобных заболеваний.

Получить посадочный материал категории (Virus free) можно лишь при помощи приёмов, объединенных в систему биотехнологии.

. Оздоровление растений осуществляется при помощи культуры апикальных меристем при относительном размере эксплантов 0,1-0,2 мм, так как установлено, что экспланты малых размеров, являются лучшими для элиминации вирусов. Для повышения низкой регенерационной способности таких эксплантов в лаборатории биотехнологии разработана оригинальная технология микроклонального размножения, защищенная 6—ью патентами. Она состоит из следующих последовательных этапов: изолирование эксплантов (центральные почки глазков) и получение асептической культуры in vitro, выделение верхушечной меристемы, индукция адвентивного побегообразования, укоренение побегов, получение пробирочных растений, высадка растений регенератов в почвенный субстрат.

Ключевым моментом технологии является регенерация целого нормального жизнеспособного растения. Успех культивирования in vitro и получение нормальных растений непосредственно связано с оптимизаций условий на каждом этапе технологии. Как правило, даже небольшие отклонения от оптимума приводят к резкому снижению скорости роста и размножения, а также к ухудшению физиологического состояния регенерантов.

Источники:

http://vinograd.info/pyblikacii/arhivy/mikroklonalnoe-razmnozhenie-vinograda.html
http://findpatent.ru/patent/204/2041609.html
http://selo-delo.ru/vinogradstvo/sistema-intensivnyh-tehnologij-proizvodstva-vinograda-v-severnoj-zone-promyshlennogo-vinogradarstva-rf-mikroklonalnoe-razmnozhenie-vinograda.html

Ссылка на основную публикацию

Adblock
detector